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不出意外，我的細(xì)胞又污染了。呃，確切地說，已經(jīng)是我第四次污染細(xì)胞了（總共五次），這是第六次細(xì)胞培養(yǎng)。希望這次能順利長好細(xì)胞！
實(shí)際上大概問題出在下面幾點(diǎn)：
1）穿戴一時(shí)爽，細(xì)胞白培養(yǎng)
進(jìn)細(xì)胞房不換鞋，不戴口罩，不戴手套，雖然感覺挺爽呼吸暢快，但其實(shí)是細(xì)胞房的大忌諱！有更嚴(yán)格的細(xì)胞房連帽子都要戴上。為什么呢？換鞋就不說了，你應(yīng)該也知道有真菌吧。但你根本不能保證你口腔支原體是不是會(huì)污染細(xì)胞，每當(dāng)你哈一口氣給細(xì)胞送溫暖的時(shí)候，細(xì)胞就……呵呵了。不戴手套，根本就清除不掉你手上的細(xì)菌真菌，要不你試試看拿火燎一下你的手，焦了才算滅菌。
2）紫外和酒精，亂用也不靈
紫外和酒精能滅菌……嗎？沒錯(cuò)，能滅菌，但是紫外和酒精最多只能滅細(xì)菌，對真菌傷害很小。你不戴手套，可勁用噴壺噴手是沒有什么卵用的。超凈臺(tái)為什么盡量要用酒精棉球而不是用酒精噴壺呢？因?yàn)橛镁凭耷虻脑?，可以在滅菌的同時(shí)把菌體從手上擼下去。而噴壺只能短暫滅菌而已，所以要多用棉球，少用噴壺。
3）生物安全柜，別超三八線
生物安全柜的玻璃窗是有警戒線的，超過這個(gè)警戒線，生物安全柜的風(fēng)簾就起不到太大作用，而且會(huì)引入室內(nèi)空氣中的真菌，比如你的臭鞋里的酵母啥的。還會(huì)讓你給細(xì)胞送溫暖的呼吸里，自動(dòng)帶上支原體。
4）拿瓶不拿蓋，拿蓋污染快
用細(xì)胞培養(yǎng)瓶來培養(yǎng)的時(shí)候，最最忌諱的是啥？是你拿瓶子的時(shí)候，手拿著有蓋子的那一面？為啥，因?yàn)橐话銇碚f瓶蓋開關(guān)是最容易接觸到瓶口的，你手拿著培養(yǎng)瓶，那手的虎口夾縫里所含有的真菌很容易就接觸到瓶蓋上，一旦造成污染，就是很嚴(yán)重的。
5）門前堆得多，霉菌找到窩
生物安全柜里操作的時(shí)候，門前最忌諱堆一堆雜七雜八的東西，你看看你，槍頭盒、血清、管子，培養(yǎng)皿、移液器、酒精噴壺、酒精燈，堆了一大堆。有的都堵住了你門前的出風(fēng)口。一來你操作起來并不是井井有條，會(huì)導(dǎo)致動(dòng)作幅度過大，擾亂氣流。二來這些東西一旦擋住風(fēng)口，也會(huì)擾亂生物安全柜的氣流，氣流變化會(huì)導(dǎo)致外部不潔凈的空氣流入，也同樣會(huì)導(dǎo)致生物安全柜的潔凈作用失效。這必須要注意！
6）清潔水浴鍋，否則雜菌多
水浴鍋是比較容易忽視的，你說你復(fù)蘇細(xì)胞的時(shí)候，37℃，對細(xì)菌真菌來說這就是溫床啊。復(fù)蘇完，濕漉漉的凍存管，任你再怎么噴酒精也并沒有什么意義了。那要怎么辦，水浴鍋一來是定期清潔，二來是加一些抑菌劑。別別別，不是讓你往里面加雙抗！水浴鍋里要加2%的硫酸銅，但這個(gè)是比較容易腐蝕水浴鍋的，所以定期也要更換清潔。
7）水盤要污染，一箱全玩完
剛才說了水浴鍋了，那接下去講講另一個(gè)坐擁37℃溫床的水環(huán)境，也就是培養(yǎng)箱的水盤。有幾次我都看到水盤里飄著特別大的一塊塊霉斑。這孢子，是你不敢想象的。一污染就一箱子全報(bào)廢了，培養(yǎng)箱要定期用0.1%的新潔爾滅或者84清洗（交替使用，防止微生物耐藥）。水盤也一樣，水盤中加入飽和的磷酸氫二鈉可以有效預(yù)防細(xì)菌真菌，但是需要定期加入去離子水防止析出。
8）滅菌滅不好，污染隨時(shí)找
細(xì)胞房所使用的槍頭，必須要經(jīng)過濕熱滅菌，但你看你，濕熱滅菌的槍頭都沒用報(bào)紙包好，不包好也就算了，滅完菌還不烤干！用報(bào)紙包裹好槍頭，是因?yàn)闇缇佉话阍诩?xì)胞房外面，所以要保證內(nèi)部槍頭盒結(jié)晶?？靖墒菫榱朔乐箖?nèi)部有水分，當(dāng)你開啟槍頭盒后，有水的地方更容易被霉菌的孢子所接觸附著，也就更容易污染。所以這個(gè)也必須要注意！
9）激情移液器，污染灑滿地
你用移液器的時(shí)候，吸液這么猛力果斷，必然會(huì)把培養(yǎng)基或者細(xì)胞沾到移液器的口上。培養(yǎng)基這種東西，就是微生物的溫床啊。不弄干凈，下次再這么激情地用移液器，必然要污染，這個(gè)必須每次使用后，用75%的乙醇，或者5%的硫酸銅，或者0.1%的新潔爾滅來擦一下的。這樣可以防止一些污染。
好了，說了這么多，這些就是你在操作的過程中，時(shí)刻需要注意的事情，養(yǎng)細(xì)胞不難，也不易。要不污染，就全要靠你時(shí)時(shí)刻刻把“無菌操作”這四個(gè)字記在腦海里。好了，今天就策這么多了，祝你們心明眼亮。 |
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