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 DH5α Chemically Competent Cell 使用說明書

產品說明：

本品為DH5α感受態細胞，缺失核酸內切酶 (endA)，且為重組酶缺陷型（recA），有利于高純度質粒DNA的提取，同時減少插入片段的同源重組概率，確保插入DNA的穩定性，為質粒轉化、基因克隆提高保障。 lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍白斑篩選。DH5α感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>5×10⁸ cfu/μg。

 產品組成：

* 基因型F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(r_k^-,m_k⁺) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

儲存條件：

-80℃±10℃保存6個月。請勿將本品置于-20℃或液氮中保存。

使用方法：

1.       將感受態細胞從-80℃冰箱中取出，置于冰水浴中融化。

2.       將目的DNA（質粒或連接產物）加入到100μL感受態細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育30分鐘。

3.       42℃水浴熱激45秒后，立刻置于冰上，靜置2～3分鐘，晃動會降低轉化效率。

4.       向離心管中加入200μL無抗LB、TB或SOC培養基，混勻后于220rpm，37℃搖床振蕩復蘇60分鐘，使轉化物表達抗性基因。

5.       根據實驗要求吸取適量菌液，涂布至相應抗生素的2YT或LB培養基上，室溫正置10分鐘，待菌液被平板充分吸收后，37℃倒置培養過夜。

注意事項：

1.       感受態細胞冰水浴中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目的DNA，不可在冰上放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2.       待轉化DNA加入體積不要超過感受態細胞體積的1/10。

3.       待轉化DNA加入感受態細胞后，請勿用移液槍吹打，輕輕彈勻即可。

4.       為確保最高效率轉化，整個操作過程應盡量輕柔，并保持冰上操作。

DH5α化學感受態細胞使用說明書

北京畢特博生物技術有限責任公司

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